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挽幕斋

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RNase  

2013-05-30 13:52:18|  分类: 医学常识 |  标签: |举报 |字号 订阅

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定义

核糖核酸酶(Ribonuclease, RNase)是一类催化RNA降解为小片段的核酸酶。在 所有已研究的有机体中都含有大量不同类型的核糖核酸酶,表明RNA降解是一个非常原始而且重要的过程。除了帮助清除细胞内不再需要的RNA,RNase同 时也参与了所有RNA分子的成熟过程,其中既包含了携带遗传物质用于指导蛋白质合成的信使RNA,也包含了细胞内功能多样的各种非编码RNA。[1]

编辑本段分类

核糖核酸酶可划分为核糖核酸内切酶(endoribonucleases)和核糖核酸外切酶(exoribonucleases)。在生物科研的日常应用中,RNaseA和RNaseH是两类最常见的核糖核酸酶,两者同属于核糖核酸内切酶亚类。[2]
RNaseA和RNaseH的结构示意图

  RNaseA和RNaseH的结构示意图[2]


RNase H

是一种核糖核酸内切酶,它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键,故能分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链。该酶不能消化单链或双链DNA。

RNase A

是一种被详细研究和具有广泛应用的核酸内切酶。RNase A 对RNA有水解作用, 但对DNA则不起作用。RNase A在C端和U端残基处专一地催化RNA的核糖部分3'-与5' -磷酸二酯键的裂开,形成具有 2',3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸。如 pG-pG-pC-pA-pG 被切割产生pG-pG-pCp 和 A-pG。可以用来去除DNA制品中的污染RNA。 它们的合成目前资料还比较少。

L19RNA

具有磷酸二酯酶、酸性磷酸酶、磷酸转移酶、核苷酸转移酶和RNA限制性内切酶等五种水解酶活性,不过它们的底物都是RNA。因此Ll9 RNA既有RNA水解酶(RNase)的作用,又有RNA聚合酶(polymerase)的作用。

编辑本段RNase的灭活和制备

RNase的灭活

RNase酶非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活,但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能使RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上,因此,在与RNA制备有关的分子生物学实验时,必须戴手套。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部,基本达到要求。玻璃制品则一般是在140度烘箱烘烤3个小时。

RNase的制备

动 物器官中含有丰富的RNase,特别是胰脏中含量更丰富。商品化的RNase大部分都是通过从牛胰脏中获得的,但目前国产的RNase活性都很低一般只有 60U/mg,而Sigma公司的能达到60KU/mg,广州捷倍斯生物公司的也能达到50KU/mg,是国产活性比较高的。

包括几种,RNase A和RNase H
  RNase H是一种核糖核酸内切酶,它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键,故能分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链。该酶不能消化单链或双链DNA。
  RNase A是一种被详细研究和具有广泛应用的核酸内切酶.RNase A 对RNA有水解作用,但对DNA则不起作用。RNase A在C端和U端残基处专一地催化RNA的核糖部分3'-与5' -磷酸二酯键的裂开,形成具有 2',3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸。可以用来去除DNA制品中的污染RNA。
  它们的合成目前资料还比较少。
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